血液S腺苷同型半胱氨酸（SAH或AdoHcy）酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒 產(chǎn)品說明書 主要用途 血液S腺苷同型半胱氨酸（SAH或AdoHcy）酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑是一種旨在通過腺苷同型半胱氨酸核苷酶、腺嘌呤脫氨酶和黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)中生成過氧化氫，使用顯色染料和過氧化酶后，產(chǎn)生醌亞胺產(chǎn)物吸光峰值的變化，即采用比色法來測定血液裂解樣品中S腺苷同型半胱氨酸含量的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于動物和人體血液樣品（血漿等）S腺苷同型半胱氨酸的定量檢測。產(chǎn)品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。 技術(shù)背景 S腺苷同型半胱氨酸（S-adenosyl-L-homocysteine；SAH或AdoHcy），化學(xué)全稱為5’-S-(3-Amino-3-carboxy propyl)-5’-thioadenosine）是一碳代謝和細胞甲基化反應(yīng)的重要分子之一，也是半胱氨酸合成的中間產(chǎn)物。其分子量384.41，分子式為C14H20N6O5S。SAH對于甲基轉(zhuǎn)移酶具有高度的親和力。SAH通過S-腺苷甲硫氨酸（S-Adenosylmethionine；SAM或AdoMet）去甲基化產(chǎn)生。SAH是評價細胞甲基化潛力和代謝狀況的重要指標(biāo)。機體內(nèi)的SAH含量顯著低于SAM。一旦SAH含量升高，即SAM/SAH比例降低，則引起DNA甲基化不足，染色體構(gòu)像改變，抑制細胞甲基轉(zhuǎn)移酶活力，干擾同型半胱氨酸和腺嘌呤的清除，進一步導(dǎo)致基因表達和信號傳導(dǎo)異常，以及免疫缺陷等。基于底物S腺苷同型半胱氨酸（S-adenosylhomocysteine；AdoHcy），快速被腺苷同型半胱氨酸核苷酶（AdoHcy nucleosidase）分解為S-核糖同型半胱氨酸（S-ribosylhomo cysteine）和腺嘌呤（adenine），腺嘌呤由腺嘌呤脫氨酶（Adenine deaminase）產(chǎn)生次黃嘌呤，通過黃嘌呤氧化酶（xanthine oxidase）催化，生成過氧化氫，然后借助過氧化酶（peroxidase）的作用，與對羥基苯甲酸（p-hydroxybenzoic acid）和氨基安替比林（4-aminoantipyrine）反應(yīng)，形成有色醌亞胺（quinoneimine），通過其吸收峰值的變化（510nm波長），來定量分析S腺苷同型半胱氨酸的含量。其反應(yīng)系統(tǒng)為： 產(chǎn)品內(nèi)容 去干擾液（Reagent A） | 微升 | 緩沖液（Reagent B） | 毫升 | 底物液（Reagent C） | 微升 | 反應(yīng)液（Reagent D） | 微升 | 陰性液（Reagent E） | 微升 | 說明書 | 1份 |
保存方式 保存去干擾液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；底物液（Reagent C）避免光照；有效保證6月 用戶自備 抗凝管：用于血液采集的容器 1.5毫升離心管：用于樣品操作和保存的容器 微型臺式離心機：用于樣品操作 恒溫培養(yǎng)箱或水槽：用于反應(yīng)孵育 比色皿或96孔板：用于比色的容器 分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于比色分析 實驗步驟 - 準(zhǔn)備好肝素抗凝管
- 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
- 放進4℃微型臺式離心機離心10分鐘，速度為700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
- 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分（注意：避免觸碰白色液體層）
- （選擇步驟）移取10微升進行蛋白定量測定
- 移取200微升血漿到新的1.5毫升離心管
- 加入xx微升去干擾液（Reagent A），混勻
- 放進冰槽里孵育30分鐘
- 放進4℃微型臺式離心機離心15分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
- 移取上清液到新的1.5毫升離心管
- 即刻置于冰槽里備用或放進－70℃冰箱里保存
- 開啟并設(shè)定好分光光度儀（溫度為37℃）：波長510nm，并置零
- 從－20℃冰箱里取出試劑，置于冰槽里融化；底物液（Reagent C）避免光照
- 緩沖液（Reagent B）室溫下均衡溫度
- 移取xx微升緩沖液（Reagent B）到新的比色皿
- 加入xx微升陰性液（Reagent E）
- 加入xx微升底物液（Reagent C）
- 加入xx微升反應(yīng)液（Reagent D）
- 上下傾倒數(shù)次，混勻
- 放進37℃恒溫培養(yǎng)箱或水浴孵育20分鐘
- 即刻放進分光光度儀檢測，此為背景空對照
- 加入xx微升緩沖液（Reagent B）
- 加入20微升待測樣品（100微克蛋白）（注意：樣品須清澈）
- 加入xx微升底物液（Reagent C）
- 加入xx微升反應(yīng)液（Reagent D）
- 上下傾倒數(shù)次，混勻
- 放進37℃恒溫培養(yǎng)箱或水浴孵育20分鐘
- 即刻放進分光光度儀檢測，此為樣品讀數(shù)
五、計算樣品濃度 - 在96孔板上做好相應(yīng)標(biāo)記：背景對照和樣品
- 分別加入xx微升緩沖液（Reagent B）
- 分別加入xx微升陰性液（Reagent E）或待測樣品（100微克蛋白）到相應(yīng)孔里（注意：樣品須清澈）
- 分別加入xx微升底物液（Reagent C）
- 分別加入xx微升反應(yīng)液（Reagent D）
- 輕輕搖動96孔板
- 放進37℃恒溫培養(yǎng)箱孵育20分鐘
- 即刻放進酶標(biāo)儀檢測
- 濃度計算：
注意事項 - 本產(chǎn)品為20次操作，包括背景對照
- 如果檢測紅細胞中的SAH濃度，建議使用細胞S腺苷同型半胱氨酸（SAH或AdoHcy）酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒
- 使用1厘米光徑的比色皿
- 操作時，須戴手套
- 系統(tǒng)操作過程中，背景測定只需1次
- 樣品中避免使用DTT、巰基乙醇、TCEP、EDTA等
- 建議使用血漿樣品為佳
- 樣品須澄清，至關(guān)重要
- 測定值由低到高變化
- 比色測定后，比色皿須清洗*
- 建議待測樣本蛋白濃度為100微克/20微升
- 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度
- 參考值：人體血漿SAM約155納摩爾/升；SAH約20納摩爾/升；SAM/SAH比值約為8.5
- 本公司提供系列醫(yī)學(xué)生化檢測試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) - 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
- 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感
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