日韩一级 片内射AAA级毛片_午夜成人动漫免费观看_国产亚洲精品日韩香蕉网_男吃奶摸下高潮6动态图_zzsp国产日韩欧美在线_欧美丝袜乱插视频_亚洲欧美人清高精品aⅴ_国产无码成本人电影_黄又色又爽很刺激的网站_久久精品亚洲一区二区三区

細菌活力藍色熒光檢測試劑盒產(chǎn)品說明書
主要用途
細菌活力藍色熒光檢測試劑是一種旨在通過使用熒光染料DAPI與染色體DNA的結(jié)合并發(fā)出熒光檢測信號來測定活體細菌和死亡細菌之比例的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實驗證明的。適用于各種環(huán)境樣品（河水、海水、市政廢水、可飲用水、土壤、沉積物等）和食物樣品的細菌檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，熒光清晰。
技術(shù)背景
作為細胞DNA染色劑之一的4，6－二咪基－4-聯(lián)苯基吲哚（4，6-diamidino-2-phenylindole； DAPI）特異性地與DNA雙螺旋的凹槽部分發(fā)生相互作用，從而與DNA的雙鏈緊密結(jié)合。結(jié)合后產(chǎn)生的熒光基團的吸收峰是358nm而散射峰是461nm，正好是UV（紫外光）的激發(fā)波長356nm，使得DAPI成為了一種常用的熒光檢測信號。
產(chǎn)品內(nèi)容
緩沖液（Reagent A） 毫升
固定液（Reagent B） 毫升
染色液（Reagent C） 微升
裂解液（Reagent D） 微升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
保存染色液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，染色液（Reagent C）避免光照，有效保證6月
用戶自備
針筒式過濾器：用于除去樣品中的液體成分
濾膜（0.2微米孔徑的硝基纖維素或醋酸纖維素或聚碳酸酯濾膜）：用于收集稀釋液體中的細菌
微型臺式離心機：用于細菌沉淀收集
1.5毫升離心管：用于細胞檢測操作的容器
碘化丙啶（Propidium Iodide；PI）染料：用于檢測死亡的細菌
37℃培養(yǎng)箱：用于孵育反應(yīng)物
熒光顯微鏡：用于觀察染色后具熒光的細菌
1
實驗步驟
實驗開始前，開啟熒光顯微鏡預(yù)熱。然后進行下列操作：
一、 液體樣品檢測（河水、海水、市政廢水、可飲用水、液體食物等）
1． 準(zhǔn)備好針筒式過濾器，濾膜為1厘米直徑和0.2微米孔徑的硝基纖維素或醋酸纖維素或聚碳酸酯
2． 移取10毫升液體樣品到針筒式過濾器
3． 真空過濾
4． 準(zhǔn)備1個1.5毫升離心管
5． 加入xx微升緩沖液（Reagent A）
6． 選擇下列方法之一繼續(xù)操作：
方法一：熒光日光法
1. 加入xx微升固定液（Reagent B）到上述1.5毫升離心管
2. 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
3. 再加入xx微升染色液（Reagent C）到離心管
4. 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
5. 小心加入上述離心管中所有溶液到針筒式過濾器里的濾膜上，鋪滿整個表面
6. 在37℃培養(yǎng)箱里孵育30分鐘，避免光照和液體蒸發(fā)
7. 真空過濾移去濾膜上的染色溶液
8. 小心移出濾膜
9. 置于載波片上
10. 即刻在熒光顯微鏡（1000倍）紫外波長濾波器下，觀察并計數(shù)活細菌量：顯示亮藍色熒光細菌的為活細菌
11. 關(guān)掉熒光，開啟白光，觀察并計數(shù)總細菌量
12. 建議觀察20個顯微鏡視野，確定總細菌量、活體細菌量和死亡細菌量及其比例
方法二：雙重染色
1． 加入xx微升固定液（Reagent B）到上述1.5毫升離心管
2． 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
3． 再加入xx微升染色液（Reagent C）到離心管
4． 繼續(xù)加入1微升（1微克/微升）用戶自備的碘化丙啶（Propidium Iodide；PI）染液
5． 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
6． 小心加入上述離心管中所有溶液到針筒式過濾器里的濾膜上，鋪滿整個表面
7． 在37℃培養(yǎng)箱里孵育30分鐘，避免光照和液體蒸發(fā)
8． 真空過濾移去濾膜上的染色溶液
9． 小心移出濾膜
10．置于載波片上
11．即刻在熒光顯微鏡（1000倍）紫外波長濾波器下，觀察并計數(shù)：顯示亮藍色熒光細菌的為活細菌
12．變更到紅色熒光濾波器下，觀察并計數(shù)：顯示紅色熒光細菌的為死細菌或膜損害細菌
13．建議觀察20個顯微鏡視野，確定活體細菌和死亡細菌的比例
2
二、固體樣品檢測（土壤、沉積物、食物等）
1． 準(zhǔn)備好1克固體樣品
2． 移入到1.5毫升離心管
3． 加入xx毫升緩沖液（Reagent A）
4． 強力渦旋震蕩30秒，充分混勻
5． 靜置1分鐘
6． 即刻移取100微升上清液體到新的1.5毫升離心管
7． 選擇下列方法之一繼續(xù)操作：
方法一：熒光日光法
1． 加入xx微升固定液（Reagent B）到上述1.5毫升離心管
2． 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
3． 加入xx微升染色液（Reagent C）到離心管
4． 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
5． 放進37℃培養(yǎng)箱里孵育10分鐘，避免光照
6． 移出10微升離心管中的混勻物到載玻片上或血細胞計數(shù)儀上
7． 放上蓋玻片
8． 即刻在熒光顯微鏡（1000倍）紫外波長濾波器下，觀察并計數(shù)活細菌量：顯示亮藍色熒光細菌的為活細菌
9． 關(guān)掉熒光，開啟白光，觀察并計數(shù)總細菌量
10．建議觀察20個顯微鏡視野，確定總細菌量、活體細菌量和死亡細菌量及其比例
方法二：裂解法
1． 加入xx微升固定液（Reagent B）到上述1.5毫升離心管
2． 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
3． 加入xx微升染色液（Reagent C）到離心管
4． 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
5． 放進37℃培養(yǎng)箱孵育10分鐘，避免光照
6． 移出10微升離心管中的混勻物到載玻片上或血細胞計數(shù)儀上的一側(cè)樣品池里
7． 加入xx微升裂解液（Reagent D）到1.5毫升離心管
8． 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
9． 放進37℃培養(yǎng)箱里孵育10分鐘，避免光照
10．再移出10微升離心管中的混勻物到新的載玻片上或血細胞計數(shù)儀上的另一側(cè)樣品池里
11．放上蓋玻片
12．即刻在熒光顯微鏡（1000倍）紫外波長濾波器下，觀察并計數(shù)：顯示亮藍色熒光細菌的為活細菌，而顯示暗淡或無熒光細菌的為死細菌或膜損害細菌
13．建議觀察20個顯微鏡視野，確定總細菌量、活體細菌量和死亡細菌量及其比例
方法三：雙重染色
1. 加入xx微升固定液（Reagent B）到1.5毫升離心管
2. 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
3. 加入xx微升染色液（Reagent C）到離心管
4. 再加入xx微升（1微克/微升）用戶自備的碘化丙啶（Propidium Iodide；PI）染液
5. 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻 3
6. 放進37℃培養(yǎng)箱里孵育10分鐘，避免光照
7. 移出10微升離心管中的混勻物到載玻片上或血細胞計數(shù)儀
8. 放上蓋玻片
9. 即刻在熒光顯微鏡（1000倍）紫外波長濾波器下，觀察并計數(shù)：顯示亮藍色熒光細菌的為活細菌
10. 變更到紅色熒光濾波器下，觀察并計數(shù)：顯示紅色熒光細菌的為死細菌或膜損害細菌
11. 建議觀察20個顯微鏡視野，確定活體細菌和死亡細菌的比例
處理三：菌液樣品（培養(yǎng)細菌等）
1. 移取1毫升細菌培養(yǎng)瓶里的新鮮菌液到新的1.5毫升離心管
2. 放進微型臺式離心機離心30秒，速度為16000g （或13000RPM，例如eppendorf 5415）
3. 小心抽去上清液
4. 加入xx毫升緩沖液（Reagent A），充分混勻
5. 移出100微升細菌樣品到新的1.5毫升離心管
6. 選擇下列方法之一繼續(xù)操作：
方法一：熒光日光法
1. 加入xx微升固定液（Reagent B）到上述1.5毫升離心管
2. 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
3. 加入xx微升染色液（Reagent C）到離心管
4. 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
5. 在37℃培養(yǎng)箱里孵育10分鐘，避免光照
6. 移出10微升離心管中的混勻物到載玻片上或血細胞計數(shù)儀
7. 放上蓋玻片
8. 即刻在熒光顯微鏡（1000倍）紫外波長濾波器下，觀察并計數(shù)活細菌量：顯示亮藍色熒光細菌的為活細菌
9. 關(guān)掉熒光，開啟白光，觀察并計數(shù)總細菌量
10. 建議觀察3個顯微鏡視野，確定總細菌量、活體細菌量和死亡細菌量及其比例
方法二：裂解法
1. 加入xx微升固定液（Reagent B）到1.5毫升離心管
2. 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
3. 加入xx微升染色液（Reagent C）到離心管
4. 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
5. 在37℃培養(yǎng)箱里孵育10分鐘，避免光照
6. 移出10微升離心管中的混勻物到載玻片上或血細胞計數(shù)儀上的一側(cè)樣品池里
7. 加入xx微升裂解液（Reagent D）到1.5毫升離心管
8. 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
9. 在37℃培養(yǎng)箱里孵育10分鐘，避免光照
10. 移出10微升離心管中的混勻物到新的載玻片上或血細胞計數(shù)儀的另一側(cè)樣品池里
11. 放上蓋玻片
12. 即刻在熒光顯微鏡（1000倍）紫外波長濾波器下，觀察并計數(shù)：顯示亮藍色熒光細菌的為活細菌，而顯示暗淡或無熒光細菌的為死細菌或膜損害細菌
13. 建議觀察3個顯微鏡視野，確定總細菌量、活體細菌量和死亡細菌量及其比例
4
方法三：雙重染色
1． 加入xx微升固定液（Reagent B）到上述1.5毫升離心管
2． 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
3． 加入xx微升染色液（Reagent C）到離心管
4． 再加入xx升（1微克/微升）用戶自備的碘化丙啶（Propidium Iodide；PI）染液
5． 用手指輕輕彈動離心管，使其充分混勻
6． 放進37℃培養(yǎng)箱里孵育10分鐘，避免光照
7． 移出10微升離心管中的混勻物到載玻片上或血細胞計數(shù)儀上
8． 放上蓋玻片
9． 即刻在熒光顯微鏡（1000倍）紫外波長濾波器下，觀察并計數(shù)：顯示亮藍色熒光細菌的為活細菌
10．變更到紅色熒光濾波器下，觀察并計數(shù)：顯示紅色熒光細菌的為死細菌或膜損害細菌
11．建議觀察3個顯微鏡視野，確定活體細菌和死亡細菌的比例
注意事項
1． 本產(chǎn)品為50次操作
2． 操作時，須戴手套
3． DAPI為半通透性的染料，可以自由進入細菌
4． 本產(chǎn)品的裂解液（Reagent D），通常情況下，可以充分溶解細菌細胞，但不排除不同菌種的耐受力；亦可使用異丙醇替代
5． 細菌稀釋性樣品（例如河水等）建議觀察20個視野計數(shù)；濃縮性樣品（例如培養(yǎng)菌等）建議觀察3個視野計數(shù)
6． 使用載波片細菌計數(shù)活體細菌和死亡細菌比例時，建議每個視野計數(shù)200個細菌
7． 使用標(biāo)準(zhǔn)血細胞計數(shù)器進行細菌計數(shù)時乘上稀釋倍數(shù)104。標(biāo)準(zhǔn)血細胞計數(shù)器（Hemocytometer）的計算方法是：
1毫米方塊的細菌計數(shù)X 104（稀釋倍數(shù)）＝實際細菌數(shù)/毫升
8． 建議細菌染色后即刻進行觀察分析，zui長不得超過2小時
9． 本公司提供系列細菌分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定熒光清晰
5