酵母雙雜交系統(tǒng)細胞轉(zhuǎn)化試劑盒 產(chǎn)品說明書 主要用途 酵母雙雜交系統(tǒng)細胞轉(zhuǎn)化試劑是一種旨在通過化學(xué)處理和物理熱休克技術(shù)，快速制備酵母感受態(tài)細胞和同步轉(zhuǎn)化兩種特定構(gòu)建的目標(biāo)質(zhì)粒DNA的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級科學(xué)家精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種實驗用酵母菌株和酵母質(zhì)粒。應(yīng)用于酵母雙雜交系統(tǒng)和其它蛋白篩選檢測等。產(chǎn)品即到即用，性能穩(wěn)定，操作簡便，轉(zhuǎn)化效率平均高達105轉(zhuǎn)化細胞/微克DNA。 技術(shù)背景 酵母菌是一種低等單細胞真核生物，具有細胞生長快，易于培養(yǎng)，遺傳操作簡單明了等原核生物的特點。作為模式生物，它具有比較完備的基因表達調(diào)控機制和表達產(chǎn)物的加工修飾能力，在分子遺傳學(xué)方面認識zui早，zui先作為外源基因表達的細胞宿主。它是一種哺乳動物基因調(diào)節(jié)的理想研究工具。其中酵母雙雜交系統(tǒng)（yeast two-hybrid assay）是一種研究蛋白質(zhì)之間相互作用或遺傳篩選的實驗工具，通過同步轉(zhuǎn)化兩種特定構(gòu)建的目標(biāo)載體（表達載體）包括結(jié)合載體—即“餌”載體（bait plasmid），和激活載體—即“捕”載體（hunter plasmid）或報告載體或基因分子庫載體，到同一感受態(tài)酵母細胞，通過氨基酸缺陷型培養(yǎng)基的選擇性培養(yǎng)和報告基因的檢測，來分析不同蛋白之間的相互作用和功能。 產(chǎn)品內(nèi)容 清理液（Reagent A） | 毫升 | 感化液（Reagent B） | 毫升 | 轉(zhuǎn)化液（Reagent C） | 毫升 | 強化液（Reagent D） | 毫升 | 培養(yǎng)液（Reagent E） | 毫升 | 說明書 | 1份 |
保存方式 保存強化液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月 用戶自備 質(zhì)粒：用于轉(zhuǎn)化的目標(biāo)DNA片段 15毫升錐形離心管：用于酵母細胞收集的容器 臺式離心機：用于酵母細胞沉淀 渦旋震蕩儀：用于混勻反應(yīng)物 搖床：用于酵母細胞孵育 恒溫水槽：用于孵育反應(yīng)物 瓊脂平板：用于轉(zhuǎn)化后酵母細胞篩選 實驗步驟 1． 準(zhǔn)備好10毫升過夜生長的新鮮酵母細胞，例如AH109菌株（OD600＝1至2；1 X 107細胞/毫升） 2． 移入到15毫升錐形離心管 3． 放進臺式離心機離心5分鐘，速度為3500g 4． 小心抽掉上清液 5． 加xx毫升清理液（Reagent A），混勻細胞顆粒群 6． 放進臺式離心機離心5分鐘，速度為3500g 7． 小心抽掉上清液 8． 加入xx毫升感化液（Reagent B），混勻細胞顆粒群 9． 放進臺式離心機離心5分鐘，速度為3500g 10．小心抽掉上清液 11．加入xx毫升感化液（Reagent B），混勻細胞顆粒群 12．放進30℃搖床孵育60分鐘，速度為100RPM 13．放進臺式離心機離心5分鐘，速度為3500g 14．小心抽掉上清液 15．加入xx毫升感化液（Reagent B），混勻細胞顆粒群 16．移取300微升到新的預(yù)冷的15毫升錐形離心管，其余的保存在4℃冰箱里備用 17．加入xx微升強化液（Reagent D） 18．加入10微升用戶自備的“餌”載體DNA（總量為5微克） 19．加入10微升用戶自備的“捕”載體或基因分子庫載體DNA（總量為2.5微克） 20．渦旋震蕩15秒 21．加入xx毫升轉(zhuǎn)化液（Reagent C） 22．渦旋震蕩15秒 23．放進30℃搖床孵育45分鐘，速度為100RPM 24．放進42℃恒溫水槽孵育20分鐘，期間每隔5分鐘，輕度渦旋震蕩5秒 25．放進臺式離心機離心5分鐘，速度為3500g 26．小心抽掉上清液 27．加入xx毫升培養(yǎng)液（Reagent E），混勻 28．（選擇步驟）放進30℃恒溫搖床孵育1小時，速度為220RPM 29．分別移取50微升均勻鋪板在選擇性培養(yǎng)基的瓊脂平板上（注意：用戶可以適量稀釋后鋪板） 30．室溫下靜置30分鐘 31．倒置瓊脂平板 32．放進30℃培養(yǎng)箱孵育2至8天，直至菌落出現(xiàn) 33．（選擇步驟）計算轉(zhuǎn)化效率（轉(zhuǎn)化細胞/微克DNA） 【菌落數(shù)X 5（毫升；轉(zhuǎn)化菌液總量）】÷【0.05（毫升；菌液鋪板容量）X 稀釋倍數(shù) X 5（微克；DNA量）】 注意事項 1． 本產(chǎn)品為20次（10毫升菌液）操作 2． 操作時須戴手套 3． 確保起始酵母菌量 4． 使用感化液（Reagent B）處理過的酵母細胞可以保存在4ºC冰箱2周 5． 如果轉(zhuǎn)化不同規(guī)格的酵母，可按比例調(diào)整使用試劑用量 2 6． 本產(chǎn)品適用于各種酵母菌株的轉(zhuǎn)化，注意選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基；建議使用本公司系列酵母培養(yǎng)基 7． 建議使用高質(zhì)純化的DNA用于轉(zhuǎn)化，確保轉(zhuǎn)化效率 8． 本產(chǎn)品轉(zhuǎn)化效率可達104－106細胞/微克DNA 9． 本公司提供系列酵母轉(zhuǎn)化實驗技術(shù)產(chǎn)品 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定 2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定轉(zhuǎn)化效率高 |
