3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）活性終點比色法定量檢測試劑盒
產(chǎn)品說明書
主要用途
3-磷酸甘油醛脫氫酶（GAPDH）活性終點比色法定量檢測試劑是一種旨在通過3-磷酸甘油磷酸激酶和3-
磷酸甘油醛脫氫酶酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)中，伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷（NADH）氧化后峰值的降
低，即采用比色法來測定樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。
其適用于各種細胞、組織、血液等裂解懸液樣品3-磷酸甘油醛脫氫酶的總活性檢測。產(chǎn)品嚴格無菌，即到
即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
3-磷酸甘油醛脫氫酶（Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase；GAPDH；EC1.2.1.12）是一種四聚體的
酶蛋白，參與催化糖酵解，分解葡萄糖分子，為機體提供能量和碳分子。同時具有轉(zhuǎn)錄激活、凋亡啟動等
功能。3-磷酸甘油醛脫氫酶存在于所有生物體的細胞漿中，而作為看家基因，常用于RNA和蛋白表達分析
的內(nèi)參標準。通過3-磷酸甘油磷酸激酶（3-phosphoglyceric phosphokinase；3-PGK）和3-磷酸甘油醛脫氫酶
酶偶聯(lián)反應(yīng)系統(tǒng)，首先底物3-磷酸甘油（3-phosphoglyceric acid；3-PGA）受到3-磷酸甘油磷酸激酶催化磷
酸化反應(yīng)，產(chǎn)生1,3-二磷酸甘油（glycerate-1,3-diphosphate）；進而由3-磷酸甘油醛脫氫酶的作用，產(chǎn)生3-磷
酸甘油醛（Glyceraldehyde-3-Phosphate；G-3-P），同時其輔酶因子還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced
nicotinamide adenine dinucleotide；β-NADH）轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide
adenine dinucleotide；β-NAD），通過測定吸光值的變化（340nm 波長），來定量分析3-磷酸甘油醛脫氫酶
的總活性。其反應(yīng)系統(tǒng)為：
產(chǎn)品內(nèi)容
緩沖液（Reagent A） 毫升
反應(yīng)液（Reagent B） 微升
底色液（Reagent C） 微升
陰性液（Reagent D） 微升
產(chǎn)品說明書1 份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，反應(yīng)液（Reagent B）和底色液（Reagent C）避免光照；有效保證6 月
用戶自備
酶標板：用于比色的容器
酶標儀：用于樣品比色分析
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實驗步驟
一、測定準備
1． 開啟并設(shè)定好分光光度儀（溫度為25℃）：波長340nm，并置零
2． 從－20℃冰箱里取出試劑，置于冰槽里融化；底色液（Reagent C）避免光照
3． 緩沖液（Reagent A）室溫下均衡溫度
二、活性測定
1． 在96 孔酶標板上做好相應(yīng)標記：背景對照和樣品
2． 分別移取xx 微升緩沖液（Reagent A）到96 孔板中
3． 分別加入xx 微升反應(yīng)液（Reagent B）
4． 分別加入xx 微升底色液（Reagent C）
5． 輕輕搖動96 孔酶標板
6． 在25℃溫度下孵育3 分鐘
7． 分別加入xx 微升陰性液（Reagent D）或待測樣品（20 微克蛋白）到相應(yīng)孔中（注意：樣品須清澈）
8． 輕輕搖動酶標板
9． 在25℃溫度下孵育10 分鐘
10．即刻放進酶標儀檢測
11．活性計算
注意事項
1． 本產(chǎn)品為50 次操作，包括背景對照
2． 操作時，須戴手套
3． 系統(tǒng)操作過程中，背景測定只需1 次
4． 樣品須澄清，至關(guān)重要
5． 孵育完成后即刻比色測定
6． 測定值由低到高變化；測定持續(xù)10 分鐘
7． 比色測定后，比色皿須清洗*
8． 建議待測樣本蛋白濃度為20 微克/5 微升
9． 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度
10．葡萄糖-6-磷酸脫氫酶單位活性定義為：在25℃，pH 7.6 條件下，每分鐘內(nèi)能夠轉(zhuǎn)化1 微摩爾3-磷酸甘
油至3-磷酸甘油醛所需的酶量作為一個活性單位
11．本公司提供系列醫(yī)學生化經(jīng)典分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標準
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感 |
